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小鼠Ⅱ型肺泡上皮細胞關(guān)鍵特性詳解

更新時間:2025-08-15  |  點擊率:324

核心優(yōu)勢

  • 功能完整性:保留表面活性物質(zhì)(二棕櫚酰卵磷脂)分泌能力,完-美模擬體內(nèi)肺泡生理功能

  • 高純度保障:經(jīng)SP-C(肺泡表面活性蛋白C)免疫熒光鑒定,純度≥90%,附完整質(zhì)檢報告

  • 無菌保障體系:通過14天微生物全項檢測(支原體/細菌/真菌),HIV-1/HBV/HCV陰性認證

  • 組織特異性:精準分離自肺泡區(qū)域,完整保留Ⅱ型細胞特征性結(jié)構(gòu)(嗜鋨性板層小體)

關(guān)鍵特性詳解

細胞形態(tài)與功能

  • 典型立方形或圓形上皮細胞樣結(jié)構(gòu),頂端突入肺泡腔

  • 胞質(zhì)內(nèi)富含嗜鋨性板層小體(直徑0.1-1.0 μm),內(nèi)含平行排列的板層狀磷脂結(jié)構(gòu)

  • 分泌表面活性物質(zhì),降低肺泡表面張力(維持呼氣時肺泡開放,吸氣時防止過度膨脹)

增殖與傳代

  • 可傳代1-2代,建議接種密度為3×10? cells/cm2

  • 具有分化為Ⅰ型肺泡細胞的潛能,可用于肺損傷修復(fù)研究

冷凍保存

  • 程序降溫+含DMSO保護液的標準化流程,解凍后細胞活力≥80%

技術(shù)創(chuàng)新

雙酶定向消化技術(shù)

  • 膠原酶Ⅰ(200U/mL)+ 中性蛋白酶(0.1%)聯(lián)合處理

  • 37℃振蕩消化25min,精準分離肺泡上皮層

  • 差速貼壁法去除成纖維細胞污染(貼壁時間差20min)

質(zhì)量控制

七維質(zhì)檢體系

  1. 形態(tài)學(xué)鑒定:倒置顯微鏡觀察典型Ⅱ型細胞特征(泡沫狀胞質(zhì)、板層小體)

  2. 表面標記檢測:SP-C/Prospero轉(zhuǎn)錄因子(SP-C是Ⅱ型細胞特異性標記)

  3. 功能驗證:嗜鋨性板層小體電鏡觀察及表面活性物質(zhì)分泌檢測

  4. 微生物檢測:PCR+培養(yǎng)法雙重驗證無菌狀態(tài)

  5. 活力檢測:臺盼藍排除法確保細胞活性

  6. 遺傳穩(wěn)定性:STR基因型分析排除交叉污染

  7. 交叉污染檢測:ISO認證細胞庫比對確認種屬特異性

應(yīng)用場景

肺疾病模型構(gòu)建

  • 肺纖維化模型(TGF-β1誘導(dǎo))

  • 急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)模型(LPS刺激)

  • 表面活性物質(zhì)功能障礙相關(guān)疾?。ㄈ缧律鷥汉粑狡染C合征)

藥物開發(fā)與毒性測試

  • 表面活性物質(zhì)替代療法藥物篩選

  • 肺泡上皮屏障通透性改變相關(guān)藥物評價

  • 納米顆粒肺部沉積與毒性研究

再生醫(yī)學(xué)研究

  • 肺損傷修復(fù)機制探究(Ⅱ型細胞向Ⅰ型細胞分化)

  • 干細胞分化為肺泡上皮細胞的誘導(dǎo)體系優(yōu)化

培養(yǎng)體系優(yōu)化

專用培養(yǎng)基CM-M003

  • 基礎(chǔ)成分:DMEM/F12 + 5%優(yōu)質(zhì)FBS(低內(nèi)毒素)

  • 生長因子:KGF(角質(zhì)細胞生長因子,10ng/mL)+ EGF(5ng/mL)

  • 保護添加劑:谷氨酰胺(2mM)+ 抗氧化劑(0.5mM)

  • 特殊添加物:1% ITS(胰島素-轉(zhuǎn)鐵蛋白-硒)

培養(yǎng)建議

  1. 包被處理:鼠尾膠原Ⅰ(2-5 μg/cm2)預(yù)處理培養(yǎng)器皿

  2. 換液策略:初始48h靜置培養(yǎng),之后每2天半量換液

  3. 傳代時機:當(dāng)細胞融合度達70-80%時,用0.25%胰酶(含EDTA)消化